{"id":477,"date":"2024-04-15T11:34:52","date_gmt":"2024-04-15T09:34:52","guid":{"rendered":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/?page_id=477"},"modified":"2024-04-15T11:38:00","modified_gmt":"2024-04-15T09:38:00","slug":"pcr-reaccion-en-cadena-de-la-polimerasa","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/pcr-reaccion-en-cadena-de-la-polimerasa\/","title":{"rendered":"PCR: REACCI\u00d3N EN CADENA DE LA POLIMERASA"},"content":{"rendered":"<p style=\"text-align: justify\">La PCR se trata de una t\u00e9cnica que permite obtener copias de ADN de manera r\u00e1pida y sencilla, como si se tratara de una verdadera fotocopiadora de muestras de ADN que se quieran amplificar.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">As\u00ed, la reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR), desarrollada en 1986 por Kary Mullis (premio Nobel en 1993, seg\u00fan \u00e9l, idea potenciada en su pensamiento gracias a otras siglas: LSD), <strong>permite sintetizar en pocas horas millones de copias de un segmento de ADN a partir de una muestra muy peque\u00f1a<\/strong>.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">Para ello se necesita:<\/p>\n<ul style=\"text-align: justify\">\n<li>El ADN que se quiere amplificar (deben conocerse los extremos) para que se sinteticen cebadores complementarios que limiten el fragmento a copiar.<\/li>\n<li>Desoxiribonucle\u00f3tidos trifosfato.<\/li>\n<li><strong>ADN cebador<\/strong> (tambi\u00e9n llamados\u00a0<em>primers<\/em> o sondas) complementario a las secuencias del ADN que flanquean el gen a copiar. Se necesita <strong>un cebador directo y otro indirecto<\/strong>, es decir, uno complementario a la secuencia del gen de una hebra (por ejemplo, la que va de 5\u00b4\u21923\u00b4) y el otro cebador complementario a la hebra de ADN complementaria (la que ir\u00eda de 3\u00b4\u21925\u00b4).<\/li>\n<li><strong>ADN polimerasa resistente al calor,<\/strong> procedente de la bacteria term\u00f3fila Thermus aquaticus (<strong>Taq-polimerasa)<\/strong> o de la Archaea Pyrococus furiosus (<strong>Pfu polimerasa<\/strong>) si se requiere una mayor precisi\u00f3n.<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify\">As\u00ed, toda esta mezcla se deposita en eppendorffs (unos tubitos de laboratorio muy peque\u00f1os) que se colocan en el termociclador (aparato que lleva a cabo la PCR), el cual sigue procesos c\u00edclicos de calentamiento y enfriamiento, seg\u00fan el siguiente procedimiento:<\/p>\n<ol style=\"text-align: justify\">\n<li><strong>Desnaturalizaci\u00f3n del ADN<\/strong>: se calienta la muestra por encima de los 90\u00ba para que se separen las hebras.<\/li>\n<li><strong>Hibridaci\u00f3n con los cebadores, <em>primers<\/em> o sondas<\/strong>: se baja la temperatura hasta 50\u00baC para que los cebadores hibriden con los extremos complementarios de cada cadena.<\/li>\n<li><strong>Polimerizaci\u00f3n de las nuevas cadenas:<\/strong> se eleva la temperatura a 72\u00baC y la ADN polimerasa de alta temperatura <em>(Taq<\/em> polimerasa) sintetiza ADN.<\/li>\n<li><strong>Acaba el ciclo y la temperatura baja a las condiciones est\u00e1ndar.<\/strong><\/li>\n<li><strong>Se repite los pasos 1-4, tantas veces como se requiera<\/strong>.<\/li>\n<\/ol>\n<p style=\"text-align: justify\">Puesto que en cada ciclo se duplica la cantidad de ADN existente, <strong>repitiendo este ciclo unas veinte veces, al tener una tendencia exponencial, se pueden obtener hasta un mill\u00f3n de copias del fragmento de ADN.<\/strong><\/p>\n<div style=\"width: 1290px\" class=\"wp-caption aligncenter\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" title=\"Zaganion, CC BY-SA 4.0 &lt;https:\/\/creativecommons.org\/licenses\/by-sa\/4.0&gt;, via Wikimedia Commons\" src=\"https:\/\/upload.wikimedia.org\/wikipedia\/commons\/0\/05\/Polymerase_chain_reaction-pt.jpg\" alt=\"PCR: reacci\u00f3n en cadena de la Polimerasa. Observa, c\u00f3mo primero desnaturalizamos el ADN (separamos ambas hebras por el aumento de la temperatura), posteriormente se produce la hibridaci\u00f3n con el cebador que delimita el fragmento de ADN a amplificar y, finalmente, se produce la copia de las hebras por la acci\u00f3n de la polimerasa.\" width=\"1280\" height=\"548\" \/><p class=\"wp-caption-text\">PCR: reacci\u00f3n en cadena de la Polimerasa. Observa, c\u00f3mo primero desnaturalizamos el ADN (separamos ambas hebras por el aumento de la temperatura), posteriormente se produce la hibridaci\u00f3n con el cebador que delimita el fragmento de ADN a amplificar y, finalmente, se produce la copia de las hebras por la acci\u00f3n de la polimerasa. Se repite el ciclo tantas veces como haga falta.<\/p><\/div>\n<p style=\"text-align: center\">\n<!-- iframe plugin v.6.0 wordpress.org\/plugins\/iframe\/ -->\n<iframe loading=\"lazy\" width=\"90%\" height=\"315\" src=\"https:\/\/www.youtube.com\/embed\/XTQ63O--lWQ?si=6Q3U_8alRVxbTeSQ&#038;amp;start=152&#038;end=236\" title=\"YouTube video player\" frameborder=\"0\" allow=\"accelerometer; autoplay; clipboard-write; encrypted-media; gyroscope; picture-in-picture; web-share\" referrerpolicy=\"strict-origin-when-cross-origin\" 0=\"allowfullscreen&gt;&lt;\/iframe\" scrolling=\"yes\" class=\"iframe-class\"><\/iframe>\n<\/p>\n<h3 style=\"text-align: center\">ELECTROFORESIS APLICADA A LA PCR<\/h3>\n<p style=\"text-align: justify\">Una vez que se ha completado una reacci\u00f3n de PCR, necesitamos poder ver los resultados.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">La interpretaci\u00f3n de estos se nos puede complicar si hemos a\u00f1adido varios cebadores que amplifiquen diferentes partes del ADN, como en una PCR multiplex o <strong>tengamos varias muestras a analizar, como el diagn\u00f3stico de varias personas con posible infecci\u00f3n v\u00edrica<\/strong> (por ejemplo esa PCR que deb\u00edamos de hacer si \u00e9ramos contacto estrecho con un enfermo de SARS-CoV-2).<\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">Para ello, se carga una muestra de la mezcla de\u00a0<strong>PCR<\/strong> en un gel de <strong>agarosa<\/strong> para <strong>electroforesis<\/strong>, el cual contiene una matriz de poros que le permite <strong>separar fragmentos de ADN en funci\u00f3n de sus tama\u00f1os.<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">Para su <strong>movimiento a trav\u00e9s del gel se aplica un campo el\u00e9ctrico<\/strong> (una diferencia de potencial o voltaje). As\u00ed, el<strong> ADN, al estar cargado negativamente, se mueve hacia el polo positivo o \u00e1nodo.<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">En su viaje a tal polo positivo, aquellas <strong>muestras m\u00e1s grandes quedar\u00e1n retenidas en los poros del gel y se depositar\u00e1n al comienzo de su camino, mientras que las m\u00e1s peque\u00f1as quedar\u00e1n m\u00e1s abajo (m\u00e1s pr\u00f3ximas al \u00e1nodo).<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">As\u00ed, <strong>te\u00f1imos los fragmentos de ADN con un marcador fluorescente<\/strong> y los vamos cargando o depositando en los diferentes pozos del gel, aplicamos la diferencia de voltaje y a esperar los resultados.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify\">Igualmente, debemos de<strong> reservar algunos pozos para las muestras control y, por supuesto, un marcador de peso molecular<\/strong> (fragmentos de tama\u00f1o conocido que nos permita extrapolar, por comparaci\u00f3n, el tama\u00f1o de nuestro fragmento de ADN).<\/p>\n<div style=\"width: 498px\" class=\"wp-caption aligncenter\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"\" src=\"https:\/\/bio.libretexts.org\/@api\/deki\/files\/55406\/Figure-9_Depiction-of-an-electrophoresis-gel.png\" alt=\"Electroforesis en gel de agarosa. Observa c\u00f3mo los fragmentos de ADN migran a lo largo del gel y van hacia el polo positivo. Igualmente, los fragmentos de un menor peso molecular (m\u00e1s peque\u00f1os) migrar\u00e1n m\u00e1s, mientras que los m\u00e1s grandes quedar\u00e1n retenidos m\u00e1s arriba. Tambi\u00e9n encontramos que tenemos una serie de pozos reservados para las muestras control y para el marcador de peso molecular, se\u00f1alado por una letra \" width=\"488\" height=\"435\" \/><p class=\"wp-caption-text\">Electroforesis en gel de agarosa. Observa c\u00f3mo los fragmentos de ADN migran a lo largo del gel y van hacia el polo positivo. Igualmente, los fragmentos de un menor peso molecular (m\u00e1s peque\u00f1os) migrar\u00e1n m\u00e1s, mientras que los m\u00e1s grandes quedar\u00e1n retenidos m\u00e1s arriba. Tambi\u00e9n encontramos que tenemos una serie de pozos reservados para las muestras control y para el marcador de peso molecular, se\u00f1alado por una letra \u00abL\u00bb.<\/p><\/div>\n<p style=\"text-align: center\">\n<!-- iframe plugin v.6.0 wordpress.org\/plugins\/iframe\/ -->\n<iframe loading=\"lazy\" width=\"90%\" height=\"315\" src=\"https:\/\/www.youtube.com\/embed\/fAp5Xh9RUEg?si=OjLIZsUXE4LoYg_N&#038;amp;clip=UgkxTdpepx82sttJEHgfMhNWtc4k-6_P_oIr&#038;amp;clipt=ENjJDhjvlBE\" title=\"YouTube video player\" frameborder=\"0\" allow=\"accelerometer; autoplay; clipboard-write; encrypted-media; gyroscope; picture-in-picture; web-share\" referrerpolicy=\"strict-origin-when-cross-origin\" 0=\"allowfullscreen&gt;&lt;\/iframe\" scrolling=\"yes\" class=\"iframe-class\"><\/iframe>\n<\/p>\n<h3 style=\"text-align: center\">APLICACIONES DE LA PCR<\/h3>\n<p>Las aplicaciones de la PCR son m\u00faltiples:<\/p>\n<ul>\n<li><strong>Amplificaciones de ADN para todo tipo de estudios evolutivos o, paleontol\u00f3gicos<\/strong>, lo que le permiti\u00f3 a Svante Paabo ganar el Premio nobel de fisiolog\u00eda el a\u00f1o 2022.<\/li>\n<li><strong>La obtenci\u00f3n de la huella gen\u00e9tica de ADN<\/strong> en medicina forense, pruebas de paternidad, etc.<\/li>\n<li><strong>Detecci\u00f3n de ADN para pruebas de diagn\u00f3stico,<\/strong> por ej., <strong>detecci\u00f3n de virus<\/strong> en etapas tempranas de infecci\u00f3n del VIH o en el SARS-CoV-2.<\/li>\n<\/ul>\n<p><!-- notionvc: 20732fd8-5206-4192-a247-24cacda33e05 --><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>La PCR se trata de una t\u00e9cnica que permite obtener copias de ADN de manera r\u00e1pida y sencilla, como si se tratara de una verdadera fotocopiadora de muestras de ADN que se quieran amplificar. As\u00ed, la reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR), desarrollada en 1986 por Kary Mullis (premio Nobel en 1993, seg\u00fan \u00e9l, [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":3666,"featured_media":0,"parent":0,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"template-fullwidth.php","meta":{"footnotes":""},"class_list":["post-477","page","type-page","status-publish","hentry","post-preview"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/477","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/pages"}],"about":[{"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/types\/page"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/users\/3666"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=477"}],"version-history":[{"count":6,"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/477\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":484,"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/477\/revisions\/484"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/edublog.educastur.es\/biohumphreys\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=477"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}